Conservación de cepas vacunales de Leptospira en nitrógeno líquido / Preservation for vaccinal strains of Leptospira at liquid nitrogen

INTRODUCCIÓN: las cepas de Leptospira interrogans que integran la vacuna cubana vax-SPIRAL® son conservadas en medio semisólido de Fletcher, el cual garantiza el mantenimiento de la viabilidad de las células por pocos meses. OBJETIVO: en este estudio, se evaluó la crioconservación en nitrógeno líquido de 6 variantes de crioprotectores como método de conservación a largo plazo de las cepas de Leptospira interrogans, utilizadas como antígenos en la vacuna antileptospirósica vax-SPIRAL®. MÉTODOS: la viabilidad se evaluó periódicamente según el rendimiento celular alcanzado por las cepas recién descongeladas en medio EMJH. La estabilidad de la virulencia fue estimada en hámster. La antigenicidad antes y después de la crioconservación fue comparada mediante microaglutinación, frente a una batería de antisueros de referencia correspondientes a los serogrupos vacunales. RESULTADOS: solo el empleo de dimetilsulfóxido a 2,5 y 5 por ciento, y glicerol 2,5 por ciento como agentes crioprotectores permitió una rápida recuperación de las 3 cepas, tras 19 meses de crioconservación sin afectación de su virulencia y antigenicidad. CONCLUSIONES: los resultados obtenidos demuestran la factibilidad de la crioconservación en nitrógeno líquido con un apropiado agente crioprotector, como método de conservación de cepas vacunales de Leptospira.

INTRODUCTION: Leptospira interrogans strains of Cuban vaccine vax-SPIRAL®are preserved in Fletcher's semi-solid medium, which guarantees the preservation of the cell viability for a few months. OBJECTIVE: to evaluate the cryopreservation at liquid nitrogen of 6 different cryoprotectors as a long-term preservation method for Leptospira interrogans strains used as antigens in vaccine vax-SPIRAL® against leptospirosis. METHODS: viability was systematically evaluated according to the cell yield of the recently thawed strains in EMJH medium. Virulence stability was estimated in hamsters and antigenicity was evaluated by microscopic agglutination test using reference antisera from vaccinal serogroups. RESULTS: the use of 2.5 percent and 5 percent dimethyl sulfoxide, and 2.5 percent glycerol allowed quick recovery of the three strains without virulence or antigenicity depletion after 19 months of cryopreservation. CONCLUSIONS: the results showed the feasibility of the cryopreservation at liquid nitrogen using suitable cryoprotectant as a preservation method for vaccinal strains of Leptospira.

Estudio seroepidemiológico de la leptospirosis humana en el departamento del Valle del Cauca, Colombia / Seroepidemiological situation of human leptospirosis in Valle del Cauca, Colombia

OBJETIVO: confirmar serológicamente la ocurrencia de leptospirosis humana en casos presuntivos procedentes del departamento del Valle del Cauca, estudiar variables clínico-epidemiológicas asociadas a la enfermedad e identificar los serogrupos de Leptospira más prevalentes en la región. MÉTODOS: se analizaron 150 muestras séricas colectadas en fase aguda, de casos con sospecha clínica y con riesgo epidemiológico de leptospirosis. Fueron evaluadas mediante hemoaglutinación indirecta y microaglutinación tomando como criterio de confirmación de la enfermedad la presencia de un título por microaglutinación mayor o igual que 1:800. Se analizaron datos epidemiológicos de interés así como síntomas y signos presentados en cada caso. RESULTADOS: las técnicas serológicas empleadas permitieron definir 31 casos confirmados (20,6 por ciento) y 16 casos probables (10,6 por ciento). Icterohaemorrhagie fue el serogrupo de mayor reactividad serológica tanto en casos confirmados como probables. Los síntomas más comunes fueron fiebre (89,3 por ciento), cefalea (86,7 por ciento) y mialgias (77,3 por ciento). Síntomas de leptospirosis severa como ictericia e insuficiencia renal fueron observados en 36 por ciento y 6,7 por ciento de los casos, respectivamente. Cerca de 70 por ciento de los casos confirmados o probables procedía de zonas urbanas y 85 por ciento resultó de hombres con un promedio de edad de 40 años. Los factores de riesgo más frecuentes fueron la exposición a roedores o animales domésticos (95,7 por ciento) y aguas potencialmente contaminadas (36,2 por ciento). CONCLUSIONES: los resultados del presente estudio sugieren que la leptospirosis constituye un problema de salud pública en el Valle del Cauca, región suroccidental de Colombia.

OBJECTIVE: to serologically confirm the occurrence of human leptospirosis in presumptive cases from the department of Valle del Cauca in Colombia, to study clinical-epidemiological data associated to the disease and to find out the most prevalent leptospiral serogroups. METHOD: a total of 150 serum samples collected during the acute phase from clinically suspected patients of having leptospirosis were analyzed. Samples were evaluated by indirect hemagglutination and microagglutination tests, taking a microagglutination titer equal to or greater than 1:800 as definition of confirmed case. Epidemiological data as well as symptoms and signs of interest were analyzed. RESULTS: these serological techniques allowed defining 31 confirmed cases (20.6 percent) and 16 probable cases (10.6 percent). Icterohaemorrhagiae was the serogroup with the higher serological reactivity in both confirmed and probable cases. Most common symptoms were fever (89.3 percent), headaches (86.7 percent) and myalgias (77.3 percent). Symptoms of severe leptospirosis like jaundice and renal failure were observed in 36 percent and 6.7 percent of cases, respectively. About 70 percent of confirmed or probable cases came from urban areas and 85 percent of them were men aged 40 years as average. The epidemiological risk factors were exposure to rats and domestic animal (95.7 percent) and potentially contaminated water (36.2 percent). CONCLUSIONS: the results of the present study suggest that leptospirosis is a public health problem in Valle del Cauca, a region located on the south west of the country.

Conservación de cepas vacunales de Leptospira a -70 ºC / Preservation of vaccine strains of Leptospira at - 70 °C

Se evaluó la crioconservación a - 70 ºC con 9 variantes de crioprotectores como método de conservación de las cepas de Leptospira interrogans, utilizadas como antígenos en la vacuna antileptospirósica vax-SPIRALâ. La viabilidad se evaluó periódicamente según el rendimiento celular alcanzado por las cepas recién descongeladas en medio EMJH. La estabilidad de la virulencia fue estimada en hámster. La antigenicidad antes y después de la crioconservación fue comparada mediante microaglutinación frente a antisueros de referencia. Solo el empleo de dimetilsulfóxido a 2,5 y 5 % o leche descremada 5 % como agentes crioprotectores permitió una rápida recuperación de las 3 cepas tras 7 meses de crioconservación sin afectación de su virulencia y antigenicidad, mientras el glicerol tuvo un efecto variable sobre el grado de recuperación de las cepas evaluadas. Los resultados obtenidos demuestran la factibilidad de la crioconservación a - 70 ºC con un apropiado agente crioprotector como método de conservación de cepas vacunales de Leptospira.

The goal of this study was to evaluate the cryopreservation at -70ºC with the use of 9 different cryoprotectants as a preservation method for the strains of Leptospira interrogans used as antigens in the leptospiral vaccine vax-SPIRALâ. Viability was systematically evaluated according to the cell yield achieved by the just thawed strains in EMJH medium. Virulence stability was estimated in Hamsters and antigenicity was evaluated by microscopic agglutination test using reference antisera before and after cryopreservation. Only the use of 2,5% and 5% dimethyl sulfoxide or 5% skim milk allowed a quick recovery of the three strains without virulence or antigenicity depletions after 7 months of cryopreservation while glycerol had a variable effect on the degree of recovery of each strain. The results showed the feasibility of the cryopreservation at -70 °C with the use of a suitable cryoprotectant as a preservation method for vaccine strains of Leptospira.

Evaluación de la potencialidad vacunal de 2 cepas de Leptospira interrogans serogrupo Ballum / Evaluation of the vaccine potentiality of 2 strains from Leptospira interrogans serogroup Ballum

Se caracterizaron 2 cepas candidatas vacunales del serogrupo Ballum y fueron estudiadas su inmunogenicidad y poder protector en hámster. Las formulaciones vacunales monovalentes obtenidas demostraron una alta inmunogenicidad y capacidad de protección homóloga y en menor cuantía de protección cruzada

Caracterización microbiológica de cepas candidatas vacunales de Leptospira interrogans serogrupo Ballum

Se caracterizaron microbiológicamente 2 cepas candidatas vacunales de Leptospira interrogans serogrupo Ballum, como parte de los trabajos encaminados a la obtención de nuevas formulaciones vacunales antileptospirósicas para uso humano. Se evaluó la cinética de crecimiento de ambas cepas en medio proteico EMJH y en 3 medios libres de proteínas. Se estimó la virulencia en hámsters mediante el cálculo de la dosis letal media. Fueron analizados los perfiles antigénicos celulares y extracelulares mediante SDS-PAGE unidimensional y comparados con aquellos de cepas pertenecientes a los serogrupos Canicola, Icterohaemorrhagiae y Pomona. La homología antigénica entre serogrupos heterólogos se analizó mediante western blotting con suero de hámsters vacunados con vax-SPIRAL®. Los resultados obtenidos demostraron un crecimiento fastidioso de ambas cepas de Ballum en los medios de cultivo estudiados, una alta virulencia en el modelo animal y una gran homología antigénica, con cepas pertenecientes a otros serogrupos de Leptospira de mayor circulación en Cuba.

Two candidate vaccines of Ballum serogroup Leptospira interrogans were microbiologically characterized as part of the work directed to the obtention of new antileptospirosis vaccine formulations for human use. The growth kynetics of both strains was evaluated in EMJH protein medium and in 3 protein free media. The virulence was estimated in hamsters by the calculation of the mean lethal dose. The cellular and extracellular antigenic profiles were analyzed by unidimensional SDS-PAGE and compared with those from strains of Canicola, Icterohaemorrhaagiaae and Pomona serogroups.The antigenic homology among heterologous groups was analyzed by western blotting with serun from hasterms vaccinated with vax-SPIRAL®. The results obtained showed a fastidious growth of both strains of Ballum in the studied media, a high virulence in the animal model and a large antigenic homology with strains from other serogroups of Lepstospira prevailing in Cuba.

Crecimiento, virulencia y antigenicidad de Leptospira interrogans serovar mozdok en medio EMJH modificado / Growth, virulence and antigenecity of Leptospira interrogans serovar mozdok in modified EMJH medium

Se evaluó la influencia de concentraciones crecientes de Tween 80 en el medio sintético EMJH sobre el crecimiento, la virulencia y antigenicidad de Leptospira interrogans serovar mozdok, para incrementar los rendimientos y aprovechar al máximo la capacidad destoxificante de la albúmina sérica bovina. El crecimiento fue evaluado espectrofotométricamente mediante el análisis de la cinética del crecimiento bacteriano, los rendimientos de biomasa obtenidos y el consumo de la fuente de carbono. La virulencia fue estimada en el modelo hámster sirio y la antigenicidad fue determinada mediante la técnica de microaglutinación frente a un antisuero policlonal de conejo. Bajo condiciones de cultivo controladas, el incremento de la concentración de Tween 80 hasta 3, 25 mg/mL determinó una aceleración del metabolismo bacteriano, que logró duplicar los rendimientos celulares con un consumo total de la fuente de carbono, sin afectación de la virulencia y antigenicidad durante numerosos subcultivos sucesivos